1. Scegliere la giusta linea cellulare
Quando scegli la linea cellulare appropriata per il tuo esperimento, considera i seguenti criteri:
a.Specie: le linee cellulari non umane e non di primati di solito hanno meno restrizioni di biosicurezza, ma alla fine il tuo esperimento determinerà se utilizzare una coltura di una particolare specie.
b.Caratteristiche: Qual è lo scopo del tuo esperimento?Ad esempio, le linee cellulari derivate dal fegato e dal rene possono essere più adatte per i test di tossicità.
c.Limitato o continuo: sebbene la scelta da una linea cellulare limitata possa fornire più opzioni per esprimere la funzione corretta, le linee cellulari continue sono generalmente più facili da clonare e mantenere.
d. Normali o trasformate: le linee cellulari trasformate di solito hanno un tasso di crescita più elevato e una maggiore efficienza di semina, sono continue e richiedono meno siero nel mezzo di coltura, ma il loro fenotipo ha subito cambiamenti permanenti attraverso la trasformazione genetica.
e. Condizioni e caratteristiche di crescita: quali sono i requisiti per velocità di crescita, densità di saturazione, efficienza di clonazione e capacità di crescita in sospensione?Ad esempio, per esprimere proteine ricombinanti con rese elevate, potrebbe essere necessario selezionare linee cellulari con tassi di crescita rapidi e capacità di crescere in sospensione.
f.Altri criteri: se si utilizza una linea cellulare limitata, è disponibile una scorta sufficiente?La linea cellulare è completamente caratterizzata o devi verificarla tu stesso?Se si utilizza una linea cellulare anormale, esiste una linea cellulare normale equivalente che può essere utilizzata come controllo?La linea cellulare è stabile?In caso contrario, quanto è facile clonarlo e generare abbastanza scorte congelate per il tuo esperimento?
2.Ottenere linee cellulari
Puoi costruire la tua coltura da cellule primarie, oppure puoi scegliere di acquistare colture cellulari stabilite da fornitori commerciali o senza scopo di lucro (ad es. banche cellulari).Fornitori affidabili forniscono linee cellulari di alta qualità che sono state accuratamente testate per l'integrità e assicurano che la coltura sia priva di contaminanti.Raccomandiamo di non prendere in prestito colture da altri laboratori perché hanno un alto rischio di contaminazione delle colture cellulari.Indipendentemente dalla sua origine, assicurati che tutte le nuove linee cellulari siano state testate per la contaminazione da micoplasma prima di iniziare a usarlo.
Tempo di pubblicazione: Feb-01-2023