1.Cos'è la coltura cellulare?
La coltura cellulare si riferisce alla rimozione di cellule da animali o piante e quindi alla loro crescita in un ambiente artificiale favorevole.Le cellule possono essere prelevate direttamente dal tessuto e scomposte mediante mezzi enzimatici o meccanici prima della coltura, oppure possono essere derivate da linee cellulari stabilite o linee cellulari.
2.Cos'è la cultura primaria?
La coltura primaria si riferisce allo stadio di coltura dopo che le cellule sono separate dal tessuto e proliferano in condizioni appropriate finché non occupano tutti i substrati disponibili (ovvero raggiungono la confluenza).A questo punto, le cellule devono essere subcoltivate trasferendole in un nuovo contenitore con mezzo di crescita fresco per fornire più spazio per la crescita continua.
2.1 Linea cellulare
Dopo la prima sottocoltura, la coltura primaria è chiamata linea cellulare o subclone.Le linee cellulari derivate da colture primarie hanno una durata di vita limitata (cioè sono limitate; vedi sotto) e mentre passano, le cellule con la più alta capacità di crescita dominano, risultando in un certo grado di genotipo nella popolazione coerente con il fenotipo.
2.2 Ceppo cellulare
Se una sottopopolazione di una linea cellulare viene selezionata positivamente dalla coltura mediante clonazione o qualche altro metodo, la linea cellulare diventerebbe un ceppo cellulare.I ceppi cellulari di solito acquisiscono ulteriori modifiche genetiche dopo l'inizio della linea parentale.
3. Linee cellulari limitate e continue
Le cellule normali di solito si dividono solo un numero limitato di volte prima di perdere la capacità di proliferare.Questo è un evento geneticamente determinato chiamato senescenza;queste linee cellulari sono chiamate linee cellulari finite.Tuttavia, alcune linee cellulari diventano immortali attraverso un processo chiamato trasformazione, che può avvenire spontaneamente o può essere indotto da sostanze chimiche o virus.Quando una linea cellulare finita subisce la trasformazione e acquisisce la capacità di dividersi indefinitamente, diventa una linea cellulare continua.
condizione 4.Culture
Le condizioni di coltura di ogni tipo di cellula sono molto diverse, ma l'ambiente artificiale per la coltura delle cellule è sempre composto da un contenitore adatto, che contiene quanto segue:
4.1 Substrato o terreno di coltura che fornisce nutrienti essenziali (aminoacidi, carboidrati, vitamine, minerali)
4.2 Fattori di crescita
4.3 Ormoni
4.4 Gas (O2, CO2)
4.5 Ambiente fisico e chimico regolamentato (pH, pressione osmotica, temperatura)
La maggior parte delle cellule dipende dall'ancoraggio e deve essere coltivata su un substrato solido o semisolido (coltura aderente o monostrato), mentre altre cellule possono crescere fluttuando nel mezzo (coltura in sospensione).
5.Crioconservazione
Se sono presenti cellule in eccesso nella sottocoltura, devono essere trattate con un agente protettivo appropriato (come DMSO o glicerolo) e conservate a una temperatura inferiore a -130°C (crioconservazione) fino al momento del loro utilizzo.Per ulteriori informazioni sulla sottocoltura e la crioconservazione delle cellule.
6.Morfologia delle cellule in coltura
Le cellule in coltura possono essere suddivise in tre categorie fondamentali in base alla loro forma e al loro aspetto (cioè morfologia).
6.1 Le cellule dei fibroblasti sono bipolari o multipolari, hanno una forma allungata e crescono attaccate al substrato.
6.2 Le cellule di tipo epiteliale sono poligonali, hanno una dimensione più regolare e sono attaccate alla matrice in fogli discreti.
6.3 Le cellule simili ai linfoblasti sono sferiche e di solito crescono in sospensione senza attaccarsi alla superficie.
7.Applicazione della coltura cellulare
La coltura cellulare è uno dei principali strumenti utilizzati nella biologia cellulare e molecolare.Fornisce un eccellente sistema modello per lo studio della normale fisiologia e biochimica delle cellule (come la ricerca metabolica, l'invecchiamento), gli effetti dei farmaci e dei composti tossici sulle cellule e la mutagenesi e gli effetti cancerogeni.Viene anche utilizzato per lo screening e lo sviluppo di farmaci e la produzione su larga scala di composti biologici (come vaccini, proteine terapeutiche).Il vantaggio principale dell'utilizzo della coltura cellulare per una qualsiasi di queste applicazioni è la coerenza e la riproducibilità dei risultati che possono essere ottenuti utilizzando un lotto di cellule clonate.
Tempo di pubblicazione: giu-03-2019